रजिस्ट्री सं. डी.एल.- 33004/99
REGD. No. D. L.-33004/99
xxxGIDHxxx xxxGIDExxx
सी.जी.-डी.एल.-अ.-02072021-228076
CG-DL-E-02072021-228076
असाधारण
EXTRAORDINARY
भाग II—खण्ड 3—उप-खण्ड (ii)
PART II—Section 3—Sub-section (ii)
प्राधिकार से प्रकाशित
PUBLISHED BY AUTHORITY
सं. 2473] नई दिल्ली, शुक्रवार, जुलाई 2, 2021/आषाढ़ 11, 1943
No. 2473] NEW DELHI, FRIDAY, JULY 2, 2021/ASHADHA 11, 1943
कृ षि और किसान कल्याण मंत्रालय
(कृ षि, सहकारिता और किसान कल्याण विभाग)
आदेश
नई दिल्ली, 1 जुलाई, 2021
का.आ.2671(अ).—के न्द्रीय सरकार, आवश्यक वस्तु अधिनियम, 1955 (1955 का 10) की धारा 3 द्वारा प्रदत्त शक्तियों का प्रयोग करते हुए, उर्वरक (अकार्बनिक, कार्बनिक या मिश्रित) (नियंत्रण) आदेश 1985 का और संशोधन के लिए निम्नलिखित आदेश करती है, अर्थात् :-
1. (1) इस आदेश का संक्षिप्त नाम उर्वरक (अकार्बनिक, कार्बनिक या मिश्रित) (नियंत्रण) पांचवां संशोधन आदेश 2021 है । (2) ये राजपत्र में उनके प्रकाशन की तारीख से प्रवृत्त होंगे ।
2. उर्वरक (अकार्बनिक, कार्बनिक या मिश्रित) (नियंत्रण) आदेश 1985, (जिसे इसमें इसके पश्चात उक्त आदेश कहॉं गया है) मे :-
(i) खंड (2) में, उपखंड (ढ़ढ़क) में "(जैसे अरंडी या नीम) कोष्ठको और शब्दो के स्थान पर" जिसमे अरंडी, नीम, कं रज (पांगामीपिनाटा) महुआ (मधुकालेगिफोलिया) जटरोफा शामिल है को रखा जाएगा ।
(ii) खंड 30 में, उपखंड (2) के स्थान पर निम्नलिखित को रखा जाएगा, अर्थात्:-
"(2) प्रयोग शाला नमूने का विश्लेषण करेगी और निम्नलिखित रिति से उपखंड (1) में निदिष्ट ज्ञापन में विनिदिष्ट प्राधिकारी को निम्नलिखित रिति से विश्लेषण रिपोर्ट भेजेगी, अर्थात्:-
(क) उर्वरक की दशा में, जैव उर्वरक, कार्बनिक उर्वरक और अखाद्य योग्य तेल रहित खली उर्वरक के सिवाय विश्लेषण रिपोर्ट प्ररूप ठ में होगी और पन्द्रह दिनो के भीतर भेजी जाएगी;
(ख) कार्बनिक उर्वरक के नमूने की दशा में विश्लेषण रिपोर्ट प्ररूप ठ1 में होगी और तीस दिनो के भीतर भेजी जाएगी;
(ग) जैव उर्वरक की दशा में विश्लेषण रिपोर्ट प्ररूप ठ2 में होगी और पैतालीस दिनो के भीतर भेजी जाएगी;
3669 GI/2021
(1)2 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] (घ) अखाद्य योग्य तेल रहित खली उर्वरक की दशा में विश्लेषण रिपोर्ट प्ररूप ठ3 में होगी और प्रयोगशाला में नमूने की प्राप्ति की तारीख से तीस दिनो के भीतर भेजी जाएगी ।";
(iii) अनुसूची III में –
(क) "[खंड (ज) और खंड (थ) देखें]" कोष्ठको, शब्दो, अंको और अक्षरो के स्थान पर "[खंड (थ) देखे] कोष्ठक, शब्द अंक और अक्षर रखे जाएंगे;
(ख) भाग क और भाग ख और उससे संबंधित प्रविष्टिया के स्थान पर निम्नलिखित भाग और प्रविष्टिया रखी जाएगी, अर्थात्:-
"भाग क
जैव उर्वरको का विनिर्देश
1. राइजोबियम
| क ु ल व्यवहार्य संख्या | सी एफ यू चूर्ण दानेदार या वाहक सामग्री का न्यूनतम 5x107 कोशिका प्रति ग्राम/या क ै प् सूल मात्रा आधारित जिलेटिन प्रति ग्राम अथवा तरल का 1x108 कोशिका प्रति मि.ली. । |
| संदूषण स्तर | 105 तनुकरण पर कोई संदूषण नही |
| पी एच | 6.5 - 7.5 |
| क्षमता विशेषता | पेके ट पर सूचीबध्द सभी प्रजातियो पर प्रभावी नोडूलेशन दिखना चाहिए और जब नियंत्रित परिस्थितियों के अधीन दी गई रीति के अनुसार परीक्षण किया जाए, 25 दिनों की बुवाई के पश्चात् परीक्षण पौधें में शुष् क पदार्थ में कम से कम 25 प्रतिशत वृद्धि होनी चाहिए । |
2. एजोटोबैक्टर
| क ु ल व्यवहार्य संख्या | सी एफ यू चूर्ण दानेदार या वाहक सामग्री का न्यूनतम 5x107 कोशिका प्रति ग्राम/या क ै प् सूल मात्रा आधारित जिलेटिन प्रति ग्राम अथवा तरल का 1x108 कोशिका प्रति मि.ली. । |
| संदूषण स्तर | 105 तनुकरण पर कोई संदूषण नही |
| पी एच | 6.5 - 7.5 |
| क्षमता विशेषता | किस्म में उपयोग किए गए प्राति ग्राम सुक्रोज मे कम से कम 10 मि.ग्रा. नाइट्रोजन के निर्धारण की क्षमता होनी चाहिए । |
| क ु ल व्यवहार्य संख्या | सी एफ यू चूर्ण दानेदार या वाहक सामग्री का न्यूनतम 5x107 कोशिका प्रति ग्राम/या क ै म्सूल मात्रा आधारित जिलेटिन प्रति ग्राम अथवा तरल का 1x108 कोशिका प्रति मि.ली. । |
| संदूषण स्तर | 105 तनुकरण पर कोई संदूषण नही |
| पी एच | 6.5 - 7.5 |
| क्षमता विशेषता | नाइट्रोजन मुक्त अर्ध ठोस ब्रोमोथइमोल नीले माध्यम मे सफे द झिल्ली का बनना । |
| कु ल व्यवहार्य संख्या | सी एफ यू चूर्ण दानेदार या वाहक सामग्री का न्यूनतम 5x107 कोशिका प्रति ग्राम या तरल का 1x108 कोशिका प्रति मि.ली.। |
| संदूषण स्तर | 105 तनुकरण पर कोई संदूषण नही |
| पी एच | 6.5 - 7.5 नम/शुष्क चूर्ण दानेदार वाहक आधारित और 5.0 - 7.5 तरल आधारित के लिए । |
| क्षमता विशेषता | जब फास्फे ट स्रोत के रूप मे ट्राइकै ल्शियम फास्फे ट या एल्यूमिनियम फॉस्फे ट या आयरन फास्फे ट का प्रयोग करते हुए दी गई रीति के अनुसार परीक्षण किया गया हो तब किस्म मे तरल यूष फास्फोरस की कम से कम 30 मि ग्रा/ली. धुलनशील क्षमता होनी चाहिए । |
5. माइकोरिजल जैव उर्वरक
| उत्पाद के कु ल व्यवहार्य बीजाणु/प्रति ग्राम | तैयार उत्पाद का न्यूनतम 10 व्यवहार्य बीजाणु प्रति ग्राम |
| पी एच | 6.0 -7.5 |
| इनोकु लम क्षमता | 10 वलव तनुकरण सहित एम.पी एन की रीति द्वारा तैयार उत्पाद की 1200 इनोकु लम क्षमता प्रति ग्राम |
6. पोटैशियम मोबिलाइजिग जैव उर्वरक (के एम बी)
- जिक घुलनशील बैक्टीरिया कु ल व्यवहार्य संख्या सी एफ यू चूर्ण दानेदार या वाहक सामग्री का न्यूनतम 5x10{{^{{FOOTNOTE 7}}}} कोशिका प्रति ग्राम/या 8. एसीटोबैक्टर 9. वाहक अधारित संघ आधारित भागीदारी ↩
| क ु ल व्यवहार्य संख्या | सी एफ यू चूर्ण दानेदार या वाहक सामग्री का न्यूनतम 5x107 कोशिका प्रति ग्राम/या क ै प् सूल मात्रा आधारित जिलेटिन प्रति ग्राम अथवा तरल का 1x108 कोशिका प्रति मि.ली. । |
| संदूषण स्तर | संदूषण स्तर |
| पी एच | चूर्ण या दानेदार के प्ररूप में वाहक आधारित के लिए 6.5 - 7.5 और तरल आधारित या जिलेटिन आधारित में कै प्सूल के लिए 5.0 - 7. 5 |
| क्षमता विशेषता | जब स्रोत के रूप मे एल्यूमिनियम पोटेशियम सिलिके ट का प्रयोग करते हुए दी गई रीति क े अनुसार परीक्षण किया गया हो तब किस्म मे तरलयूष मे जिक की कम से कम 20 मिग्रा/ली. घुलनशील क्षमता होनी चाहिए । |
| क ु ल व्यवहार्य संख्या | सी एफ यू चूर्ण दानेदार या वाहक सामग्री का न्यूनतम 5x107 कोशिका प्रति ग्राम/या क ै म्सूल मात्रा आधारित जिलेटिन प्रति ग्राम अथवा तरल का 1x108 कोशिका प्रति मि.ली. । |
| संदूषण स्तर | 105 तनुकरण पर कोई संदूषण नही |
| पी एच | चूर्ण या दानेदार के प्ररूप में वाहक आधारित के लिए 6.5 - 7.5 और तरल आधारित के लिए 5.0 - 7. 5 |
| क्षमता विशेषता | जब जिक स्रोत के रूप में जिक ओक्साइड/जिक कारबोनेट/जिक फास्फे ट का प्रयोग करते हुए दी गई रीति के अनुसार परीक्षण किया गया है तब किस्म के तरल यूष में जिक की कम से कम 20 मिली/ली. घुलनशील क्षमता होनी चाहिए । |
| पी एच | 3.0 - 6.0 नम/शुष्क चूर्ण दानेदार या वाहक के लिए 5.5 – 6.0 और तरल के लिए 3.0 - 6.0 |
| क्षमता विशेषता | अर्ध ठोस माध्यम एन मुफ्त माध्यम मे पीली सी झिल्ली का सूत्रीकरण |
| वैयक्तिक अवयवी व्यवहार्य संख्या | निम्नलिखित सूक्ष्मजीव मे से किन्ही 2 या अधिकतम तीन के मिश्रण में न्यूनतम सी एफ यू :- न्यूनतम सी एफ यू राइजोबियम या एजोबैक्टर या एजोसपिरिलम 1x107 प्रति ग्राम |
| न्यूनतम पी एस बी सी एफ यू 1x107 कोशिका प्रति ग्राम (ग्रा) | |
| न्यूनतम के एस बी सी एफ यू 1x107 कोशिका प्रति ग्राम (ग्रा) | |
| उत् पाद के सभी जैव उर्वरक की कु ल व् यवहार्य संख् या | न् यूनतम सी एफ यू वाहक/चूर्ण का 1x107 कोशिका प्रति ग्राम |
| क्षमता विशेषता | मात्रात्मक आकलन के माध्यम से वैयक्तिक जैव उर्वरक के मामले मे यथा उल्लिखित विनिश्चयित किये जाने वाले वैयक्तिक सूक्ष्मजीव का दक्षता स्वरूप |
| वैयक्तिक अवयवी व्यवहार्य संख्या | निम्नलिखित सूक्ष्मजीव मे से किन्ही 2 या अधिकतम तीन के मिश्रण में न्यूनतम सी एफ यू :- न्यूनतम सी एफ यू राइजोबियम या एजोबैक्टर या एजोसपिरिलम 1x107 कोशिका प्रति ग्राम |
| न्यूनतम पी एस बी सी एफ यू 5x107 कोशिका प्रति मि.ली. (मि.ली.) | |
| न्यूनतम के एस बी सी एफ यू 5x107 कोशिका प्रति मि.ली. (मि.ली.) | |
| उत् पाद के सभी जैव उर्वरक की कु ल व् यवहार्य संख् या | न् यूनतम सी एफ यू 1.5 x108 कोशिका प्रति मि.ली.. (मि.ली.) |
| पी एच | 5.0-7.0 |
| संदूषण स् तर | किसी तनुकरण पर कोई संदूषण नही |
| क्ष मता विशेषता | मात्रात्मक आकलन के माध्यम से वैयक्तिक जैव उर्वरक के मामले मे यथा उल्लिखित विनिश्चयित किये जाने वाले वैयक्तिक सूक्ष्मजीव का दक्षता स्वरूप |
| बीजाणू संख् या | न् यूनतम 1x106 बीजाणु/ग्रा. तरल के न् यूनतम 1x107 व् यवहार्य फं गल बीजाणु/एम एल |
| संदूषण स् तर | वाहक आधारित तैयारी के लिए तरल इनोकु लम 1x103 कोशिका प्रति ग्राम के लिए शुन् य |
| पी एच | तरल – 3.5 से 5.5 वाहक – 6.0 से 7.7 |
| क्षमता विशेषता | जब फास् फे ट स्रोत के रूप मे टैरिकै लशियम फास् फे ट या एल् यूमिनियम फास् फे ट या आयरन फास् फे ट का प्रयोग करते हुए दी गई रीति के अनुसार परीक्षण किया गया है तब किस् म के तरल यूष में फास् फे ट की कम से कम 30 मि.ली./ली. घुलनशील क्षमता होनी चाहिए |
2. भागीदारी की दशा में, कु ल व्यवहार्य संख्या वाहक आधारित की दशा में 1x107 और तरल सूत्रीकरण की दशा में 1x108 से कम नही होगी ।
3. माइकोरिजल जैव उर्वरक के मामले में, कु ल व्यवहार्य बीजाणु पूर्ण उत्पाद के 8/प्रति ग्राम से कम नही होगी ।";
(ग) भाग घ में –
(I) "1क राइजोबियम जैव उर्वरक के विश्लेषण की रीति" शीर्ष के अधीन पैरा 5 में उप पैरा 3 के स्थान पर निम्नलिखित उप पैरे रखे जाएंगे, अर्थात् :-
"5.3 प्रकिया
5.3.1 1 मिनट तक बीजों को 70 प्रतिशत एल्कोहल में डुबोए, अल्कोहोल को निकाल दे और बीजों को 3 मिनट तक ताजा तैयार किए गए 5% सोडियम हाइड्रोक्लोराइड घोल में बीज को डूबाये या पेच टोपीदार बोतल या रबड से लटकाने वाली परीक्षण नली से किसी उपयुक्त आधान में तीन मिनट तक 0.1 प्रतिशत मरक्यूरिक क्लोराइड घोल में डुबोदें । निर्जीवाणुक को निकाल दे और निजीर्वाणुक से मुक्त होने के लिए जीवाणुहीन जल से बीजों को कई बार कम से कम दस बार धोएं ।
5.3.2 मिट्टी के पात्र या काचित पात्र मिट्टी 2 भाग मिट्टी और 1 भाग अपरिष्कृ तरत) (पी एच 6 से 7) से भरे और 120 डिग्री सेंटीग्रेड पर 2 घंटे तक उष्मित करे, कक्ष तापमान में दो दिन के उष्मायन के पश्चात्, मिट्टी की पूर्ण निर्जीवाणुता सुनिश्चित करने के लिए उष्मित करे । 5.3.3 निर्जीवाणाकृ त बीज को प्रति 50 ग्राम बीज के निर्जीवाणु जल के साथ 2 मि. ली. मिश्रित 1 ग्राम का टीका वाले कल्चर पैके ट से दिए गए टीके के गदले जले से उपचार करे टीका न लगाए गए बीज (निर्जीवाणुकृ त अपनी सतत परन्तु टीके से अनुपचारति) के साथ पात्रो को एक सैट नियंत्रण के रूप मे रखे । परिवर्तनो से निपटने के लिए प्रत्येक उपचार के लिए कम से कम चार या पॉंच पात्र रखे । 5.3.4 परीक्षण पौधों के लिए समुचित मौसमो के दौरान उन्हे पात्र-कल्चर हाऊस मे उष्मायन को नियंत्रण पात्र से टीका लगाए गए पात्र पाते को अलग करने का ध्यान रखे । वैकल्पिक रूप से 16 घंटे के प्रकाश और 8 घंटे के अंधेरे के साथ तापमान (28 सेल्सियस) ; आद्र्रता (65 %) और प्रकाश तीव्रता (10 किलो लक्स) को समायोजित करने की सुविधा वाले नियंत्रित पर्यावरणीय परिस्थतियों के अधीन ग्रोथ चेंबर या ग्रोथ कै बिनेट्स मे टीका लगाए गए गए और टीका न लगाए गए पात्र को उष्मायन करे ।
5.3.5 उष्मायन के पहले दिन प्रत्येक पात्र को एक बार निष्कीटित ग्रोथ माध्यम (5.1 में यथानिदिष्ट) के साथ मिट्टी की नमी-धारण क्षमता तक सिचाई करे । तत्पश्चात् बीजो को समय समय पर निष्कीटित पानी से पानी दे, टीका लगाए गए (पात्र) से टीका न लगाए गए पात्र तक पानी छिडकाव को रोकने के लिए ध्यान रखे ।
5.3.6 दो सप्ताह की प्राप्ति के बाद, प्रत्येक पात्र मे पौधो की संख्या को चार समान पौधो तक कम कर दे । 25 दिनों के अंत मे पौधो को धीरे बहते पानी के नींचे मिट्टी से सावधानीपूर्वक अलग करे, टीका लगाए गए और टीका न लगाए गए पौधो को अलग रखे । प्रत्येक पौधे पर नोडयूल्स की संख्या को अलग अलग टीका लगाए गए और टीका न लगाए गए पात्र में रिकार्ड करे । अलग-अलग पौधो (अँकु सा+जड़) को एक ओवन मे 60 डिग्री सेल्सियस पर 48 घंटे के लिए अलग से सुखाए और सूखा वजन रिकार्ड करे । टीका लगाए गए और टीका न लगाए गए पौधो के औसत शुष्क वजन की गणना करे ।
5.3.7 शुष्क पदार्थ की उपज मे वृद्धि की गणना निम्नप्रकार है
| शुष्क पदार्थ मे वृद्धि प्रतिशत | डब्लू 1 – डब्लू 2 | X 100 |
| डब्लू 2 |
डब्यू 2 = टीका न लगाए गए पौधे के अंकु र का औसत सुखा वजन नियंत्रण
5.3.8 यदि टीका लगाए गए पौधो मे पूर्ण अनुपस्थिति या कभी 2 नियंत्रण मे विचलित नॉड्युल की उपस्थिति के साथ अच्छा नॉडयूलेशन प्राप्त होता है और यदि असंक्रमित नियंत्रण पर पौधो के शुष्क द्रव्यमान मे 25% की वृद्धि होती है तो निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि तनाव पर्याप्त रूप से नॉडयूलिग है और प्रभावी है ।"-
II 1 सी एजोसपिरिलम जैव उर्वरक के विश्लेषण की रीति शीर्ष के अधीन –
(i) पैरा 1 से पहले निम्नलिखित उप-शीर्ष अंत:स्थापित किए जाएंगे, अर्थात् :-
"कु ल व्यवहार्य संख्या और पतली झिल्ली सूत्रीकरण को विनिश्चित करने की रीति"
(ii) सारणी 1 और उससे संबंधित प्रविष्टियों के पश्चात निम्नलिखित पैरा अंत:स्थापित किया जाएगा, अर्थात् :-
6 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)]संदूषण के अवधारण की पद्धति-
मध्यम
के एच2 पी ओ 4 – 0.5 ग्राम
मिग्रा एस ओ 4.7 एच 20 – 0.2 ग्राम
एन ए सी एल 1 - 0.1 ग्राम
खमीर तत्व 0.5 ग्राम
एफ ई सी एल 13.6 एच20 – 0.15 ग्राम
डी एल-मैलिक एसिड- 4.8 ग्राम
के ओ एच – 4.8 ग्राम
*कांगो विभेदन – 15.0 मि.ली.
अपसशस्या – 20.0 ग्राम
जल - 1000 मि.ली.
*के ओ एच के 0.1 एन के साथ पी एच 7 के लिए समायोजन
1000 मि.ली. जल में 2.5 ग्राम भार कांगो लाल घोल
टिप्पण 1 ;प्लेट संगणानाओं के उष्मायन, प्लेट गणनाओं के लिए क्रमांक अवमिश्रण प्लेटों के लिए क्रमांक अवमिश्रण प्लेटों के लिए विसंक्रमण विनिमित की प्रक्रिया और उपनिवेशों की गणना –रिजोबियम के रुप में वहीं
टिप्पण 2 ; रोजो कांगो मध्यम एजोसपीरिलम (क. लिपोफे रम और क. ब्राजीलेंस) 1.5 से 2 मिमी व्यास) की स्थिरता शुष्क के साथ लाल कालनियों के शेस्क, गोल या अनियमित रुप उभिमान तीक्षणता और मध्य से विकिरणकारी तीक्षणताओं के साथ सतह भुरीक्षया के रुप में प्रतीत होता हो ।
III शीर्षक के अधीन "1.स माइकोरिजल बायोफर्टीलाइजर" के लिए विश्लेषण की पद्धति
"3. कु ल जीवनश्रय बीजाणुओं का प्राक्कलन
अंतिम उत्पाद से बीजाणुओं की सस्य
अ. गीला शोषक और विस्तारण पद्धति द्वारा
ंखला और (क) उपस्कर और प्रतिकर्मक : नाइलोन या उत्पाद या नमूना से जीवनक्षय पृथक के लिए जीवनक्षय आकारों की वृहद श्रृ
नायलोन या जाली अंगरोधी इस्पात शोषकों को घेरना
(i) सूक्ष्म आकारो जीवनक्षयों के लिए 40-50 माइक्रान (0.04 मि.मी.)) शोषक
(ii) मध्यम आकारी जीवनक्षयमों के लिए 100 माइक्रान (0.14 मि.मी.) जीवनक्षम
(iii) अधिक वृहद आकारी जीवनक्षयमों और स्पोरकार्पस के लिए 250 माइक्रान (0.25 मि.मी.) जीवन क्षय
(iv) मूल अंशाभ्यास और अन्य मलबा हटाने के लिए 450 माइक्रोन (0.45 मि.मी.)) शोषक
(v) मूल अंशाभ्यास और अन्य मलबा हटाने के लए 1 मिलीमीटर शोषक
(vi)प्रक्षालन बोतलें में अंतविष्ट जल
(vii) शोषक संग्रहण के लिए मर्तबान
(viii) त्रिविमदर्शी
(ix) त्रिविमदर्शी के अधीन शीर्षक अवलोकन के लिए पैट्री तशतरियां (11 से.मी.)
(x) चयन बीजाणु के लिए माइक्रोपेंटस
(xi) अपकें द्रित
(ख) प्रक्रिया
ंखलाओं जल का सारवान मात्रा में मिश्रीत 100 ग्राम माइक्रोफिजल जैव उर्वरक और जाली आकार के क्रम के अवशोषण में शोषकों की श्रृ के माध्यम से निस्तारण को व्यवस्थित किया जाता है । मूलों और अपरिषकृ त शोषकों (1 मिलीमीटर और 450 माइक्रोन) पर शोषक मलबों पर संग्रहण किया जाता है जब कि धातुशोषक एक या अधिक पर बीजाणुओं को प्रगहणित किया जाता है जल के साथ प्रबल प्रक्षालन मटियार भारिक सामग्री या कार्बनिक सामग्री के समूहों से बीजाणुओं को मुक्त होने के लिए आवश्यक है । मात्र मर्तबानों में7 [भाग II—खण्ड 3(ii)] भारत का राजपत्र : असाधारण शोषक को संग्रहण करे । पेट्री तशतरी और स्टेरियोस्कोप के अधीन अवलोकन संग्रणित के लिए उन पर शोष को हस्तांतरण करे । प्लेट तशतरी में बीजाणुओं की संख्या में गणना करें और नमूना के बीजाणु ग्राम के रुप में इसे अभिव्यक्त करें ।
(आ) सैंट्रीफिगुएशन प्रवणता इक्षुशंर्क रा द्वारा (वैकल्पिक)
(i) उपरोक्त वणित पद्धति द्वारा शोषक में संग्रहण करें । सेंटीफींग ट्यूब और क्षैतिज घूर्णन में 1,750 आर पी एम पर 5 मिनट के लिए उसमें बीजाणुओं को हस्तांतरण करें ।
(ii) सावधानी से पलावी द्रव को निस्तारण करें और 60% ईक्षुरा घोल में गुटिका को पुनः रोक लें । पुनः 2-5 मिन्ट के लिए पुनः सेंट्रिफिक करें ।
(iii) 45 माइक्रान शोषक में पलावी (बीजाणुओं के साथ) उड़ेलें और शर्क रा हटाने के लिए जल साथ आक्षालन करें । पेट्री तशतरियां/ प्लेट घर्षणित में छलनी को हस्तांतरित करें और विन्यासदर्शी के अधीन अवलोकन करें । प्लेट/ तश्तरी में बीजाणुओं की संख्या की गणना करें और नमूना के बीजाणुओं की संख्या की गणना करें और नमूना के बीजाणुओं की संख्या की गणना करें और नमूना के बीजाणुओं ग्राम के रुप में इसे अभिव्यक्त करें ।
3.2 बीजाणु अभिरंजन
(क) उपस्कर और अभिकर्मक
(1) पूर्व वर्णन के अनुसार बीजाणु निष्कर्षण के लिए उपस्कर और अभिकर्मक
(2) 2,5-डिफिनायल-2एन टेट्राजोलियम ब्रोमाइन (एम.टी.टी)
(3) आसुत जल
(4) ऐपिट्राफ टयूब
(5) विन्यासदर्शी
(6) पेट्री तश्तरियां
(ख) प्रक्रिया
i. एम टी टी (2,5-डाइफिनाइल- 2 एन-टेट्राजोलियम ब्रोमाइड) का 0.25 % घोल तैयार करें
ii प्रकाश में एम टी टी घोल के खुलाव से बचें क्योंकि अभिरंजन हलकों सूक्ष्मग्राही हैं
iii अभिरंजन घोल में उपयु र्क्त वणित दो पद्धतियों में कोई द्वारा संगहित बीजाणुओं (संख्या में लगभग 50) के ए एम एफ ताजे संग्रहण में जोंड़ें और अंधेरे में जीवाणुहीन एपेनड्रोफ टयूबों में 27 डिग्री सेंटीग्रेड पर उष्मायनित करें ।
iv. 24 घंटे, 48 घंटे और उष्मायन 72 घंटों के पश्तात् क्षेत्र के अंधेरे के अधीन त्रिविमदर्शी उपयोग करते हुए अभिक्रियाओं के विभिन्न रंगों के लिए बीजाणुओं का अवलोकन करें ।
v. ऐसे बीजाणु जो लाल या गुलाबी अभिरंजक हैं, निम्नलिखित फामू र्ला के अनुसार जीवनक्षयम है
%बीजाणु = बीजाणुओं की संख्यां जो लाल या गुलावी अभिरंजक है X 100
जीवनक्षमता कु ल बीजाणुओं की संख्या
4.1 संभाव्य संरोप का निर्धारण
(क) सामग्री की आवश्यकता
(i) अनावश्यक कागज/प्लास्टिक कप (250 मिलिलीटर) या पी.वी.सी. टयूब (15 से.मी.लंबा 3.2 से.मी. डायामीटर)
(ii) प्लास्टिक थैली (30 से.मी. x 20 से.मी.)
(iii) निवीजित तनुकारी (रेत: मृदा मिश्रण 1:1)
(iv) प्याज या रागी बाजरा (रागी)
(ख) प्रक्रिया
(i) प्लास्टिक थैली में नमूना का 30 ग्राम तौंले और नीविजित तनुकारी (रेत: मृदा मिश्रण 1:1) । 10-1 तनुकारी पाने के लिए पूर्णतः8 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] (iv) प्रत्येक प्याले में प्याज /रागी बाजरे के बीजों को बोएं
(v) उभड़ने के पश्चात् प्रति ट्यूब /प्याला के वल पौधा के लिए तनु अधोवाही और पाद्प गृह में पौधों को बढ़ने दो या 45 दिन (कागज में/ प्लास्टिक प्याले) या 25 दिन (पी वी सी ट्यूबों में) के लिए कक्ष को प्रस्फु टित करें ।
(vi ) शस्य पर व्यवकलक से मुक्त नवअंकु रों को और ट्राइपन नीले के साथ उन्हें अभिरंजन को धोएं (अभिरंजन प्रक्रिया नीचे दिया गया है) ।
(vii) सूक्ष्मदर्शी विभित मत के अधीन प्रत्येक दोहराने बनाने में माइक्रोफिजल की उपस्थिति या अनुपस्थिति का अवधारण करें । एम पी एन गुरुतोंओं की गणना के लिए विभिन्न तनुकरण में सकरात्मक ट्यूब (जो मायराफील में शामिल हो) की गणना करें ।
(viii) एजोसिरिबिलियम जैव उर्वरकों के विश्लेषण की पद्धति के अधीन सारणी 1 5.3.3, 1 सी पर दिए गए कोहरण (195)) की एम पी एन सारणियों का उपयोग करें ।
टिप्पण : 1- पी वी सी ट्यूवों का उपयोग लाभकारी है क्योकि यह वयपकालक से कम उसके साथ 25 दिन परिणाम देता है । 4.2 एम पी एन प्रक्कलन के लिए रीति विज्ञान और स्पष्टीकरण :
(i) गणना में उदाहरण के लिए जो चार ततुकरणों (10-1, 10-2, 10-3 और 10-4) में से प्रत्येक बार (ट्यूब) दोहराएं सकारात्मक ट्यूबों जैसे 5,5,3,2की सम्मीश्रण की संख्या को अभिप्राप्त करें ।
(क) आवश्यक सामग्री
(iii) लैक्टो ग्लिसरॉल घोल (20 मिली लैक्टिक एसिड, 40 मिली ग्लिसरॉल, 40 मिली डिस्टिल्ड वॉटर)
(iv) लैक्टो ग्लिसरॉल घोल में 0.05% ट्रिपैन ब्लू (0.5 ग्राम/लीटर)
(ख) प्रक्रिया
1. मृदा कचरा से मूलों को साफ करें और टोटी जल के अनेक परिवर्तनों में आक्षालन करें ।
2. 1 घंटे के लिए 90 डिग्री सेंटी ग्रेड या 15 मिन्ट के लिए 120 डिग्री सेंटी ग्रेड पर 10% के ओ एच में मूलों को सुखाएं ।9 [भाग II—खण्ड 3(ii)] भारत का राजपत्र : असाधारण 3. के ओ एच हटाएं और के ओ एच हटाने के लिए जल (2-3 बार) के साथ मूलों को आक्षालन करें । 4. 5 मिन्ट के लिए 1% एच सी एल में मूलों को सुखाएं ।
5. एच सी एल को हटाए। इस कदम के पश्चात् मूल आक्षालन करें इसी तरह से समुचित अभिरंजन के लिए अम्लीकृ त अवश्य होना चाहिए ।
6. 1 घंटे के लिए 900 डिग्री सेंटी ग्रेड या 5 मिनट के लिए 1200 डिग्री सेंटी ग्रेड पर कर्णपटल नीला अंतविष्ट करके अम्लीय ग्लीकिरोल घोल में मूलो को स्टेन करें ।
7. स्टेन को अलग करें और अवलोकन तक लैक्टो ग्लिसरॉल में मूलों को सुरक्षित करें ।
8. मूलों को लगभग 1 से.मी. टुकड़ों में काट लें और लैक्टो ग्लिसरॉल के साथ सूक्ष्मदर्शी स्रालाइडों में हथेली पर रखें, और सरका के आवरण स्थान पर रखें माइकोरिहिजल बनाने के लिए सूक्ष्मदर्शी के अधीन अवलोकन करें । (IV) अनुसूची IV में -
(क) भाग क में
(अ) पैरा 1 में, कचरा मिश्रित खाद
I मद (v) में प्रतीक और अंक <"1.0" के स्थान पर प्रतीक और अंक "<1.20", रखा जाएगा ;
II मद (xi) में अंकों "6.5-7.5" के स्थान पर अंकों "6.0-8.0", रखा जाएगा ;
III मद (xii) में अंक "4.0" के स्थान पर अंक "6.0", रखा जाएगें ;
(आ) पैरा 3 में
I मद (iv) में अंक "7.9" के स्थान पर अंक "10.0", रखे जाएगें ;
II मद (vi) में अंक "10.4" के स्थान पर अंक "8.0", रखे जाएगें ;
III मद (ix) में अंक "8.2" के स्थान पर अंक "10.0", रखे जाएगें ;
(इ) पैरा 4 में मद (xi) में अंक के स्थान पर "4.0" अंक "5.0", रखे जाएगें;
(ख) भाग ख और इससे संबंधित प्रविष्टियों के स्थान पर निम्नलिखित भाग और प्रविष्टियां रखी जाएंगी ।
"भाग ख
कार्बनिक उर्वरकों की सहय्ता सीमा
कचरा मिश्रित खाद के मामले में नाइट्रोजन, फास्फोरस और पोटेशियम पोषक तत्वों का कु ल योग 1 प्रतिशत से कम नहीं होना चाहिए, वर्मीकम्पोस्ट के मामले में 2.5%, जैविक खाद के मामले में 2.8% से कम नहीं होना चाहिए। पी आर ओ एम के मामले में पी2ओ5 सामग्री के संदर्भ में फॉस्फे ट सामग्री 7.8% से कम नहीं होनी चाहिए।
ंज घनत्व के प्रक्कलन क्रम संख्या (इ) अनुसूची (IV) में भाग घ में "कार्बनिक उर्वरकों के विश्लेषण की पद्धति" प्रपु
3 में "गणन" शार्षक के पैरा के स्थान पर निम्नलिखित पैरा रखा जाएगा, अर्थात्:-
| प्रपु ंज घनत्व | नमूना का भार (डब्लयू 2- डब्ल्यू 1) |
| मात्रा (वी 2) |
डब्ल्यू 1 = 100 मीलीलीटर शुष्क सिलेंडर का भार
डब्ल्यू 2 = 100 मीलीमीटर चिन्ह तक नमूने के साथ सिलेंडर का भार
वी 1 = सघन (100 मिलीलीटर चिन्ह तक) से पूर्व सिलेंडर में नमूना की मात्रा
वी 2= संघ के पश्चात् सिलेंडर में नमूना की मात्रा";
(V) प्ररुप 'ञ' में –
(क) क्रम संख्या (3) में, प्रविष्टि (iv) के पश्चात् निम्नलिखित प्रविष्टि अंतःस्थापित की जाएगी, अर्थात्:-
10 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)]"(v) बैच उत्पाद अवसान की तारीख";
(ख) क्रम संख्या 13 में, "नाम और पता" शब्दों के स्थान पर "नाम, पता और ई-मेल आई डी" अंतःस्थापित किया जाएगा ।
[फा. सं. 2-5/2020 उर्व. विधि]
नीरजा अड्डिडम, संयुक्त सचिव टिप्पण : मूल आदेश सा.का.नि. 758 (अ), तारीख 25 सितंबर, 1985 द्वारा भारत के राजपत्र में प्रकाशित किया गया था और का.आ. 2333 (अ) तारीख 14 जून, 2021 द्वारा अंतिम संशोधन किए गए थे।
MINISTRY OF AGRICULTURE AND FARMERS WELFARE
(Department of Agriculture, Cooperation and Farmers Welfare)
ORDER
New Delhi, the 1st July, 2021
S.O. 2671 (E). — In exercise of the powers conferred by section 3 of the Essential Commodities Act, 1955 (10 of 1955), the Central Government hereby makes the following Order further to amend the Fertiliser (Inorganic, Organic or Mixed) (Control) Order, 1985, namely:—
1. (1) This Order may be called the Fertiliser (Inorganic, Organic or Mixed) (Control) Fifth Amendment Order, 2021.
(2) It shall come into force on the date of its publication in the Official Gazette.
2. In the Fertiliser (Inorganic, Organic or Mixed) (Control) Order, 1985, (hereinafter referred to as the said Order),- (i) in clause ( 2), in sub-clause (nna), for the brackets and words ―(such as Castor, Neem)", the words "including Castor, Neem, Karanj (Pongamiapinnata), Mahua (madhucalongifolia) and Jatropha‖ shall be substituted;
(ii) In clause (30), for sub- clause (2) the following shall be substituted, namely:—
―(2) The laboratory shall analyse the sample and forward the analysis report to the authority specified in the memorandum referred to in sub-clause (1) in the following manner, namely:—
(a) in case of fertiliser, other than biofertilizer, organic fertilizer and de oiled cake fertilizer, the analyzing report shall be in Form L and forwarded within fifteen days;
(b) in case of the sample of organic fertilizer, the analysis report shall be in Form L1, and forwarded within thirty days;
(c) in case of biofertilizer, the analysis report shall be in Form L2 and forwarded within forty-five days;
(d) in case of deoiled cake fertilizer, the analysis report shall be in Form L3 and forwarded within thirty days from the date of receipt of sample in the laboratory.‖;
(iii) in Schedule III,-
(a) for the brackets, words, figure and letters ―[See clause (h) and (q)]‖, the brackets, words, figure and letters ―[See clause (q)‖ shall be substituted;
( b) for Part A and Part B and the entries relating thereto, the following Parts and entries shall be substituted, namely: —
― Part A
SPECIFICATION OF BIOFERTILISER
1. Rhizobium
| Total viable count | CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material/or per gram capsule content in gelatin base or 1x108 cell per ml of liquid. |
| Contamination level | No contamination at 105 dilution. |
| pH | 6.5-7.5 |
| Efficiency character | Should show effective nodulation on all the species listed on the packet and there should be minimum of 25% increase in dry matter yield in test plant, after 25 Days After Sowing (DAS) when tested as per the method given under controlled conditions. |
2. Azotobacter
- Acetobacter Total viable count CFU minimum 5x10{{^{{FOOTNOTE 7}}}} cell per gram of powder, granules or 9. Carrier Based Consortia 10. Liquid Consortia ↩
| Total viable count | CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or per gram gelatin bases capsule content or 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. |
| Contamination level | No contamination at 105 dilution. |
| pH | 6.5-7.5 |
| Efficiency character | The strain should be capable of fixing at least 10 mg of nitrogen per gram of sucrose consumed. |
| Efficiency character | Formation of white pellicle in semisolid Nitrogen free Bromothymol blue media. |
| T otal viable count | CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. |
| Contamination level | No contamination at 105 dilution. |
| pH | 6.5-7.5 for moist/dry powder,granulated carrier based and 5.0-7.5 for liquid based. |
| Efficiency character | The strain should be capable of solubilizing at least 30 mg/litre of Phosphorus in liquid broth when tested as per the method given using Tricalcium Phosphate or Aluminium Phosphate or Iron Phosphate as Phosphate source. |
| Total viable spores/gram of product | Minimum 10 viable spore per gram of finished product. |
| pH | 6.0-7.5 |
| Inocculum potential | 1200 IP per gram of finished product by MPN method with10 fold dilution. |
| T otal viable Count | CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or or per gram of capsule content or 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. |
| Contamination level | No contamination at 105 dilution. |
| pH | 6.5-7.5 for carrier based in the form of powder or granules and 5.0-7.5 for liquid base or capsule in gelatin based. |
| Efficiency character | The strain should be capable of solubilizing at least 20 mg/litre of Potash in liquid broth when tested as per the method given using Aluminium Potassium Silicate as K source. |
| T otal viable count | CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or per gram of capsule content 1x108 cell per milliliter(ml) of liquid. |
| Contamination level | No contamination at 105 dilution. |
| pH | 6.5-7.5 for carrier based in the form of powder or granules and 5.0-7.5 for liquid base. |
| Efficiency character | The strain should be capable of solubilizing at least 20 mg/litre of Zinc in liquid broth when tested as per the method given using Zinc Oxide/ Zinc Carbonate/ Zinc Phosphate as Zinc source. |
| T otal viable count | CFU minimum 5x107 cell per gram of powder, granules or carrier material or per gram of capsule content 1x108 cell per milliliter (ml) of liquid. |
| Contamination level | No contamination at 105 dilution. |
| pH | 5.5- 6.0 for moist /dry powder, granulated or carrier and 3.0-6.0 for liquid. |
| Efficiency character | Formulation of yellowish pellicle in semi solid medium N free medium. |
| I ndividual organism viable Count | CFU minimum in a mixture of any 2 or maximum three of following micro-organisms: C FU minimum Rhizobium or Azotobacter or Azospirillum 1x107 cells per gram (g). |
| CFU minimum PSB 1x107 cells per gram (g) | |
| CFU minimum KSB 1x107 cells per gram (g) | |
| Total viable count of all the biofertilisers in the product | CFU minimum 3x107 cells per gram of carrier/powder. |
| Efficiency character | The efficiency character of individual microorganisms to be determined as mentioned in case of individual biofertilizers through quantitative estimation methods. |
| Individual organism viable count | CFU minimum in a mixture of any 2 or maximum three of following microorganisms: CFU minimum Rhizobium or Azotobacter or Azospirillum 5x107 cells per milliliter (ml). |
| CFU minimum PSB 5x107 cells per milliliter (ml). | |
| CFU minimum KSB 5x107 cells per milliliter (ml). | |
| Total viable count of all the biofertilisers in the product | CFU minimum 1.5x108 cells per milliliter (ml). |
| pH | 5.0-7.0 |
| Contamination level | No contamination at any dilution. |
| Efficiency character | The efficiency character of individual microorganisms to be determined as mentioned in case of individual biofertilizers through quantitative estimation methods. |
11. Phosphate Solubilising Fungal biofertilisers
| Spore Count | Minimum 1x106 spores/gram Minimum 1x107 viable fungal spores/ml of the liquid. |
| Contamination level | Nil for liquid inoculums 1x103 cells per gram for carrier based preparation. |
| pH | Liquid: 3.5 to 5.5 Carrier: 6.0 to 7.7 |
| Efficiency character | The strain should be capable of solubilizing at least 30 mg/litre of Phosphorus in liquid broth when tested as per the method given using Tricalcium Phosphate or Aluminium Phosphate or Iron Phosphate as Phosphate source. |
Part B
TOLERENCE LIMITS OF BIOFERTILIZER
1. In case of Rhizobium, Azotobacter, Azospirillum Phosphate Solubilising Bacteria, Potash14 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)] 5.3.6 After two weeks of growth, thin down the number of plants in each pot to four uniform plants. At the end of 25 days, separate the plants carefully from the soil under slow running water. Keep inoculated and uninoculated plants separately. Record the number of nodules on each plant, separately from inoculated and un-inoculated pots. Dry the individual plants (shoot + root) in an oven at 600C for 48 hours, separately and record dry weight. Calculate average dry weight of inoculated and un-inoculated plants.
5.3.7 Calculate the increase in dry matter yield as under
| % increase in dry matter = | W1 – W2 | x 100 |
| W2 |
Where W1 = average dry weight of inoculated plant shoot W2 = average dry weight of control un-inoculated plant shoot.
5.3.8 If good nodulation is obtained in inoculated plants together with total absence or sometimes presence of stray nodules in controls and if there is a 25% percent increase in the dry mass of plants over the uninoculated control, it may be concluded that the strain is adequately nodulating and is effective.‖;
II. Under the heading‖ 1C Method of Analysis of Azospirillum biofertilizers,‖-
(i) before paragraph 1, the following sub-heading shall be inserted, namely:-
―Method of determination of total viable count and Pellicle formation‖
(ii) after Table 1 and entries relating thereto, the following paragraph, shall be inserted, namely:-
B. Method of determination of Contamination
Medium
KH2PO4 0.5gram
MgSO4.7H2O 0.2 gram
NaCl 0.1 gram
Yeast Extract 0.5 gram
FeCl3.6H2O 0.015 gram
DL-malic acid 5.0 gram
KOH 4.8 gram
*Congo resolution 15.0 ml
Agar 20.0 gram
Water `1000 ml
Adjust to pH 7 with 0.1N of KOH
*Congo red solution weigh 2.5 g in 1000 ml water
Note 1;- Sterilizing and preparation procedure for plates, serial dilution for plate counts, incubation of plates and counting of colonies – Same as of Rhizobium.
Note 2;- On Rojo Congo medium, Azospirillum (A. lipoferum and A. brasilense) colonies shall appear as scarlet red colonies with dry consistency, diameter of 1.5 to 2 mm, round or irregular form, undulate edge, and rugose surface with ridges radiating from the center.
III. Under the heading ―1. E. Method of analysis for Mycorrhizal Biofertlisers‖, for paragraphs 3 and 4, the following paragraphs shall be substituted, namely:-
"3. Estimation of total viable spores
Harvesting of spores from finished product
A. By wet sieving and decantation method
15 [भाग II—खण्ड 3(ii)] भारत का राजपत्र : असाधारण(a) Equipment and Reagent: Stalking sieves with nylon or stainless steel mesh and a large range of pore sizes for isolating spores from the product or sample
(i) 40-50 micron (0.04 mm) sieve for small sized spores.
(ii) 100 micron (0.14 mm) sieve for medium sized spores.
(iii) 250 micron (0.25 mm) sieve for very large sized spores and sporocarps.
(iv) 450 micron (0.45 mm) sieve for removing root bits and other debris.
(v) 1 mm sieve for removing root bits and other debris.
(vi) Wash bottles containing water.
(vii) Jars for collecting the sieving.
(viii) Stereomicroscope
(ix) Petri dishes (11 cm) for observing the sieving under stereomicroscope
(x) Micropipettes for spore picking.
(xi) Centrifuge
(b) Procedure
Mix 100 gram Mycorrhizal biofertiliser in a substantial volume of water and decant through a series of sieves arranged in descending order of mesh size. Roots and coarse debris are collected on coarse sieves (1mm and 450 micron), while spores are captured on one or more finer sieves. Vigorous washing with water is necessary to free spores from aggregates of clay carrier material or organic materials. Collect the sieving in jars. Transfer the sieving on to the gridded Petri dishes/plate and observe under stereomicroscope. Count the number of spores in plate/dish and express it as spores/gram of the sample.
(B) By Sucrose gradient centrifugation (optional)
(i) Collect the sieving by the method described above. Transfer the sieving into centrifuge tubes and centrifuge for 5 minutes at 1,750 rpm in a horizontal rotor. (ii) Decant the supernatant liquid carefully and resuspend pellet in 60% sucrose solution. Again centrifuge for 2-5 minutes. (iii) Pour the supernatant (with spores) onto a 45 micron sieve and rinse with water to remove the sugar. Transfer the sieving onto the gridded Petri dishes/ plate and observe under stereomicroscope. Count the number of spores in plate/ dish and express it as spores/gram of the sample.
3.2 Spore staining
(a) Equipment and Reagent
(1) Equipment and reagents for spore extraction as described previously (2) 2,5-diphenyl-2N-tetrazolium bromide (MTT) (3) Distilled water (4) Eppendorf tubes (5) Stereomicroscope (6) Petri dishes
(b) Procedure
(i) Prepare 0.25% solution of MTT (2,5-diphenyl-2N-tetrazolium bromide)
(ii) Avoid exposure of MTT solution to light, as the stain is light sensitive
(iii) Add freshly collect AMF spores (approximately 50 in number) collected by any of the two methods described above to the staining solution and incubate at 270 C in sterile Eppendorf tubes in dark (iv) Observe the spores for different colour reactions using stereomicroscope under dark field after 24 hours, 48 hours and 72 hours of incubation.
(v) Spores, which stained red or pink, are treated as viable, as per the following formula:
| % Spore viability = | Number of spores which stained red or pink | x 100 |
| Total number of spores |
4. 1 Assessment of Inoculum Potential
16 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)](a) Materials needed:
i. Disposable paper/ plastic cups (250 ml) or PVC tubes (15 cm long; 3.2 cm dia.) ii. Plastic bags (30 cm x 20 cm)
iii. Sterilized diluents (sand: soil mix 1:1)
iv. Onion or Finger millet (ragi) seeds
(b) Procedure:
(i) Weigh 30 gram of sample in a plastic bag and add to it 270 gram of sterilized diluents (sand: soil mix 1:1). Shake thoroughly to get 10-1 dilution.
| Total IP/gm = | Value from MPN Table x Dilution level of P2 |
| Dry mass of product sample taken |
4.3. Staining roots to observe Mycorrhizal colonization
Colonization of root cortex cells by Arbusicular Mycrrohizal Fungus does not alter root morphology. Therefore, to detect and measure mycorrhizal colonization, roots are subjected to a clearing and staining procedure.
(a) Materials needed:
(i) 10% KOH solution (Potassium Hydroxide)
(ii) 1% HCl solution (Hydrochloric acid)
(iii) Lacto Glycerol solution (20 ml Lactic acid, 40 ml Glycerol, 40 ml distilled water) (iv) 0.05% Trypan Blue in Lacto Glycerol solution (0.5g/L)
(b) Procedure:
18 THE GAZETTE OF INDIA : EXTRAORDINARY [PART II—SEC. 3(ii)]| Bulk Density = | Weight of sample (W2-W1) |
| Volume (V2) |
Where W1 = Weight of 100 ml dry cylinder W2 = Weight of the cylinder along with the sample upto 100 ml mark V1 = Volume of sample in cylinder before compacting (up to 100 ml mark) V2 = Volume of sample in cylinder after compacting.‖;
(V). in Form ‗J',-
(a) in serial number (3), after entry (iv) , the following entry shall be inserted namely:—
―(v) the date of expiry of the batch product‖;
(b) in serial number 13, for the words ―Name and Address‖, the words ―Name, Address and e-mail ID‖ shall be inserted.
[F.No.2-5/2020 Fert.Law]
NEERAJA ADDIDAM, Jt. Secy.
Note: The principal order was published in the Gazette of India vide GSR number 758(E), dated the 25th September, 1985 and was last amended vide. number S.O 2333 (E) dated 14th June, 2021
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